Kitobdan iqtiboslar Микробиология. Практикум для выполнения лабораторно-практических работ. Учебникmuallif Р.Т. Маннапова
бумагой.
Микроскопическая картина: кислотоспиртоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (не обесцвечиваются кислотой), некислотоустойчивые — в синий (первоначально окрасившись фуксином в красный цвет, легко обесцвечиваются кислотой и воспринимают дополнительную окраску метиленовой сини) — рис. 2.2, б.
Рис. 2.2. а — окраска по Граму; б — окраска по Цилю — Нельсену
грамположительные микробы фиолетового цвета, а грамотрицательные — розового (рис. 2.2, а).
Окраска микроорганизмов по этому методу зависит от химического состава клеточной стенки (наличие муреина и частично липида) и цитоплазмы, pH среды, от различия в строении бактериальной стенки у Гр+ и Гр– микробов.
2.3.4. Окраска по Цилю — Нельсену
На фиксированный мазок наносят небольшой кусок фильтровальной бумаги, на него — раствор карболового фуксина. Снизу препарат подогревают над пламенем горелки до появления паров и оставляют на «мостике» 5–7 мин. Затем краску с бумагой убирают (не промывая). Наносят 3–5%-ный раствор серной кислоты, окрашивают 5–7 мин, хорошо промывают водой. Затем добавляют раствор метиленовой сини (по Леффлеру), окрашивают 4–5 мин. Препарат промывают водой и высушивают фильтровальной
капли воды и окрашивают 2–3 мин. Затем снимают бумагу, мазок не смывают. На этом этапе все микробы на препарате окрашиваются в фиолетовый цвет.
2.Наносят раствор Люголя на 2 мин, смывают водой. Раствор Люголя содержит йод, который фиксирует фиолетовое окрашивание Гр+ микробов.
3.Обрабатывают 96-градусным этиловым спиртом, выдерживают в течение 20–30 с и тщательно смывают мазок водой. Спирт обесцвечивает за такое короткое время Гр- микробы.
4.Докрашивают мазок фуксином в течение 2–3 мин и смывают водой.Грамотрицательные окрашиваются в розовый цвет.
5.Высушивают на воздухе и микроскопируют.
Микроскопическая картина
Метод Грама (модификация по Синеву). Этот метод позволяет разделить все микроорганизмы на две группы: грамположительные (Гр+) и грамотрицательные (Гр–).
На фиксированный мазок помещают:
1.Кусочек фильтровальной бумаги, пропитанной 1%-ным спиртовым раствором генцианвиолета, наносят 2–3
Сложные способы позволяют: определить морфологию микробов, установить их тинкториальные особенности (разное окрашивание при использовании специальных методов), наличие или отсутствие структурных элементов клетки (капсула, спора) и др. Это специальные методы исследований. К сложным способам окрашивания относятся: окраска по Граму (дифференцирует микробы на грамположительные и грамотрицательные), по Цилю –Нельсену (на микобактерии туберкулеза), по Козловскому (на бруцеллез), по Михину и по Ольту (на капсулы), по Златогорову и Пешкову (на споры
охлажденный фиксированный мазок наносят раствор краски, выдерживают 3–5 мин, затем краску смывают, мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсионной системой микроскопа
высоких температур разрушаются клетки. Для этого препараты погружают в
Физический способ фиксации — над пламенем горелки. При этом методе предметное стекло с мазком берут большим и указательным пальцами или пинцетом, проводят три-четыре раза над пламенем горелки, каждый раз прикладывая стекло к коже руки. Ощущение легкого жжения свидетельствует о том, что мазок фиксирован. При этом способе фиксации микробы погибают и плотно прикрепляются к стеклу.
Химический способ фиксации мазков применяется при исследовании крови и мазков-отпечатков из тканей и органов, так как под влиянием
Для этого препараты погружают в фиксирующую жидкость: в этиловый спирт — на 10 мин, в смесь Никифорова (спирт плюс эфир, 1:1) — на 15 мин, в метиловый спирт — на 5 мин, в ацетон — на 5 мин
подразделяются на бактерии, бациллы и клостридии. Их размеры колеблются от нескольких долей микрометра до 10–15 мкм и более. Различают короткие, длинные, тонкие и толстые палочки. Концы у них могут быть закруглены или резко обрублены. Некоторые палочковидные бактерии имеют разветвленную (микобактерии) или овоидную форму, характерную для пастерелл. Они могут располагаться одиночно или беспорядочно, группироваться попарно (диплобактерии, стрептобациллы). Встречаются как сапрофитные, так и патогенные виды.
Бактерии — имеют цилиндрическую форму и не образуют спор (например, возбудители туберкулеза, бруцеллеза, рожи свиней, листериоза).
Различают палочковидные формы бактерии, которые образуют споры. Среди спорообразующих существуют собственно бациллы и клостридии.